PVDF膜即聚偏二氟乙烯膜(polyvinylidene fluoride)是蛋白質(zhì)印跡法中常用的一種固相支持物。PVDF膜是疏水性的,膜孔徑有大有小,隨著膜孔徑的不斷減小,膜對低分子量的蛋白結(jié)合就越牢固。大于20000的蛋白選用0.45um的膜,小于20000的蛋白選用0.2um的膜。PVDF膜在使用是需預(yù)處理,用甲醇處理的目的是活化膜上的正電基團(tuán),使其更容易與帶負(fù)電的蛋白結(jié)合。PVDF膜具有較高的機(jī)械強(qiáng)度,是印跡法中的理想固相支持物材料。
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尼龍膜是較理想的核酸固相支持物,有多種類型;硝酸纖維素膜(NC膜)是目前應(yīng)用廣的一種固相支持物,價格;PVDF膜介于二者之間。
就溫度適應(yīng)性而言:尼龍膜經(jīng)烘烤或紫外線照射后,核酸中的部分嘧啶堿基可與膜上的正電荷結(jié)合;硝酸纖維素膜(NC膜)依靠疏水性相互作用結(jié)合DNA,結(jié)合不牢固;PVDF膜結(jié)合牢固,耐高溫,特別適合于蛋白印跡。
就重復(fù)性而言:尼龍膜可反復(fù)用于分子雜交,保護(hù)膜雜交后,探針分子可經(jīng)堿變性被洗脫下來;硝酸纖維素膜(NC膜)不能重復(fù)使用;PVDF膜可以重復(fù)使用。
PVDF膜即聚偏二氟乙烯膜(polyvinylidene fluoride)是蛋白質(zhì)印跡法中常用的一種固相支持物。PVDF本質(zhì)是一種疏水性的聚合物,在水溶液中不會浸濕,保護(hù)膜為了在水性緩沖液和系統(tǒng)中使用PVDF膜,首先必須將其浸泡在50%(v/v)或更高濃度的醇溶液中。(PVDF膜在使用時需預(yù)處理,用甲醇處理的目的是活化膜上的正電基團(tuán),使其更容易與帶負(fù)電的蛋白結(jié)合。保護(hù)膜)甲醇、乙醇和異丙醇都適合浸泡這種膜。隨著膜的外觀從不透明到半透明,完全浸濕是顯而易見的。之后必須用水反復(fù)沖洗以去除醇類,經(jīng)預(yù)處理的膜可以直接放入轉(zhuǎn)印緩沖液中平衡。
一旦膜被浸濕,蛋白結(jié)合可通過蛋白與膜的接觸而實(shí)現(xiàn)。由于蛋白與膜的結(jié)合貫穿整個膜的厚度(深度),結(jié)合能力是由孔的內(nèi)部表面積來決定的,隨著膜孔徑的不斷減小,膜對低分子量的蛋白結(jié)合就越牢固。0.2um PVDF膜內(nèi)部表面積大約是0.45um PVDF 膜的三倍,使其吸附能力更高。PVDF膜是疏水性的,一般大于20kD的蛋白就可以用0.45μm的膜,小于20kD的蛋白就要用0.2μm的膜。
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